桑螟胞外铜锌超氧化物歧化酶基因的克隆与融合表达及重组蛋白酶活性检测
摘要 桑螟(Glyphodes
pyloalis)是蚕区桑园的主要害虫之一,鉴定其抵御各种环境胁迫相关的基因,是制定防治新策略的重要理论依据。对桑螟幼虫转录组数据的分析中,发现桑螟胞外铜锌超氧化物歧化酶(ecCu/ZnSOD)基因在应对高温胁迫时的表达量发生显著变化。为了明确ecCu/ZnSOD在桑螟应对不良环境中发挥的作用,克隆和鉴定了其编码基因GpecCu/ZnSOD(GenBank登录号:MG566057)。GpecCu/ZnSOD基因的开放阅读框长726 bp,编码241个氨基酸,编码蛋白质序列与脐橙螟(Amyelois transitella)的一种SOD蛋白基因(GenBank登录号:XP_013197347.1)编码氨基酸序列的一致性高达83%。采用邻近相接法构建桑螟与其他昆虫的Cu/ZnSOD系统发生树,结果显示Cu/ZnSOD被分为ecCu/ZnSOD和icCu/ZnSOD两类,主要是随物种进化而进化。采用半定量RT-PCR检测不同温度处理桑螟5龄幼虫的GpecCu/ZnSOD基因表达情况,结果显示幼虫体内的GpecCu/ZnSOD在高温(