家蚕Met1基因的表达与组织定位分析
摘要 选择家蚕基因组中与果蝇DmMet(Methoprene tolerant protein)同源的基因BmMet1进行研究。预测DmMet和BmMet1的结构域均是一个bHLH-PAS(basic helix-loop-helix Per-ARNT-SIM)型转录因子,具有典型的DNA结合结构域。在原核系统表达获得了BmMet1蛋白并制备了抗体。qRT-PCR和Western blotting检测结果显示,无论是BmMet1基因 mRNA的转录还是BmMet1蛋白的表达,在家蚕5龄中后期和吐丝期的翅原基组织中都呈现较高水平,而在蛹期呈现较低的水平。通过免疫组织化学方法分析BmMet1的组织定位,结果显示该蛋白质在5龄第6天和吐丝期家蚕胸节表皮、脂肪体及翅原基等组织中都有较高水平的表达,在蛹期上述部位和组织的表达水平较低。分别将蜕皮激素(20E)和保幼激素类似物(Methoprene)按照2 μg/头的剂量注射到5龄第3天幼虫第2~3胸节间,qRT-PCR检测幼虫翅原基组织中的BmMet1受到Methoprene的诱导上调表达,且在处理2 h后表达水平最高。上述结果暗示BmMet1可能参与了保幼激素对家蚕翅原基生长分化的调控。
关键词 家蚕; BmMet1基因; 表达特征; 翅原基; 保幼激素类似物