摘要  海藻糖在保护细胞质膜和生物大分子空间结构，维持胞内渗透压增大的过程中发挥重要作用，海藻糖合成酶是海藻糖合成途径中的一个关键酶。通过检索微孢子虫基因组数据库发现，家蚕微孢子虫（Nosema bombycis）基因组中含有4个海藻糖合成酶基因，其中Nbtps1基因的开放阅读框长1 386 bp，为单外显子结构，编码461个氨基酸残基，预测蛋白质分子质量53.7 kD，等电点5.19。NbTPS1蛋白序列含有1个糖基转移酶结构域和4个潜在的N-糖基化位点，亚细胞定位预测该蛋白质位于细胞质中。多重序列比对分析结果表明，NbTPS1与东方蜜蜂微孢子虫(Nosema ceranae)、兔脑炎微孢子虫(Encephalitozoon cuniculi)海藻糖合成酶的氨基酸序列相似度分别为59.0%、54.7%，系统发育进化树显示三者的亲缘关系与之相符。构建重组表达载体Nbtps1/pET-28a（+）并转化大肠埃希菌Rosetta（DE3）菌株，经IPTG诱导表达及亲和纯化后获得最终质量浓度为1.18 mg/mL的重组融合蛋白His-NbTPS1。用纯化后的融合蛋白制备兔多克隆抗体Anti-NbTPS1，利用间接ELISA法测定多克隆抗体的效价达1∶25 600，并通过Western blotting检测验证了该多克隆抗体的特异性，为研究NbTPS1的生物学功能以及家蚕微孢子虫的间接免疫检测奠定了实验基础。

关键词  家蚕微孢子虫； 海藻糖合成酶； 基因克隆； 序列分析； 原核表达； 多克隆抗体