摘要  一些病毒复制过程涉及到断裂双链DNA的修复，主要有同源重组和非同源的末端连接2种修复形式。基于这种修复机制建立了构建重组杆状病毒的无缝克隆方法，采用该方法构建重组病毒的2个主要元件是：线性化的复制缺陷型杆状病毒载体和重组拯救DNA片段。杆状病毒载体经Bsu36Ⅰ酶切后产生2个末端，即切短了的orf1629 3′末端和细菌人工染色体（BAC）末端。其中，含克隆目的基因的重组拯救DNA片段通过同源臂同源重组修复病毒载体orf1629缺失的3′端序列，并通过细胞内的非同源末端连接修复细菌人工染色体片段（BAC）Kan^r末端，从而使载体环化产生重组杆状病毒。应用该方法构建重组杆状病毒无需构建重组载体，无需进行重组后筛选，具有成本低、效率高的特点。

关键词  无缝克隆； 线性化； 重组杆状病毒； 复制缺陷； 重组拯救