摘要  海藻糖是家蚕微孢子虫（Nosema bombycis，Nb）成熟孢子的主要糖类物质之一，海藻糖酶作为海藻糖代谢的主要催化酶，在微孢子虫的发芽及侵染过程中发挥重要作用。通过生物信息学分析发现，家蚕微孢子虫的海藻糖酶具有4个序列相似度较高的编码基因拷贝（NbTre1、NbTre2、NbTre3和NbTre4），除了NbTre4 编码蛋白质的N端有18个氨基酸组成的信号肽，其他拷贝的编码蛋白质均没有信号肽结构域，但都具有少数的N-糖基化位点，而没有O-糖基化位点，此外，丝氨酸磷酸化位点的比率也较高，二级结构较为简单，仅有螺旋区和低复杂度区。基于生物信息学分析结果，设计特异性引物克隆了NbTre1基因，该基因片段长933 bp，编码310个氨基酸，预测蛋白质分子质量36.7 kD，蛋白质的氨基酸序列有2个潜在的N-糖基化位点和14个磷酸化位点。通过构建重组表达载体并转化Escherichia coli Rosetta(DE3)感受态细胞，获得NbTre1蛋白的表达菌株，利用IPTG诱导获得大量以包涵体形式表达的融合NbTre1蛋白，其分子质量与预期值一致。融合NbTre1蛋白经亲和层析纯化后免疫新西兰白兔制备多克隆抗体，利用间接ELISA法测定多克隆抗体的效价达1∶25 600。通过Western blot检测验证了该多克隆抗体的特异性，制备的多克隆抗体能够应用于家蚕微孢子虫海藻糖酶的检测等。

关键词  家蚕微孢子虫； 海藻糖酶； 序列特征； 基因克隆； 原核表达； 多克隆抗体