家蚕杆状病毒DNA聚合酶在Bac-to-Bac系统的表达及活性检测
摘要 DNA复制是杆状病毒生活史中最重要的事件,其中DNA 聚合酶是病毒复制过程的关键酶。从家蚕杆状病毒(BmNPV)基因组PCR扩增获得DNA聚合酶基因BmNPV-pol的序列,利用Bac-to-Bac 系统构建重组杆状病毒vBmNPV-POL,并感染家蚕5 龄幼虫,通过SDS-PAGE 和Western blotting 检测重组BmNPV-POL蛋白在蚕体内成功表达,经Ni-NTA柱纯化获得了纯度较高的重组BmNPV-POL蛋白。以poly(dA)/oligo(dT)为模板,比较在原核细胞和家蚕杆状病毒表达系统获得的重组BmNPV-POL蛋白的酶活性,结果表明在家蚕幼虫体内表达并纯化的重组BmNPV-POL的酶活性明显较高。利用家蚕杆状病毒表达系统简便、快速获得重组BmNPV-POL蛋白,有助于后续对BmNPV复制机制的研究。
关键词 DNA聚合酶; 家蚕杆状病毒表达系统; 重组蛋白; 酶活性