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  • 国内刊号:CN 32-1115/S
  • 国际刊号:ISSN 0257-4799
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  • 主办单位:中国蚕学会
    中国农业科学院蚕业研究所
  • 主编:李木旺
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家蚕杆状病毒DNA聚合酶在Bac-to-Bac系统的表达及活性检测

【期刊年份】2016年第06期
【作者姓名】陈慧卿 楚茨 周亚竟
【作者单位】江苏大学生命科学研究院

摘要  DNA复制是杆状病毒生活史中最重要的事件,其中DNA 聚合酶是病毒复制过程的关键酶。从家蚕杆状病毒(BmNPV)基因组PCR扩增获得DNA聚合酶基因BmNPV-pol的序列,利用Bac-to-Bac 系统构建重组杆状病毒vBmNPV-POL,并感染家蚕5 龄幼虫,通过SDS-PAGE Western blotting 检测重组BmNPV-POL蛋白在蚕体内成功表达,经Ni-NTA柱纯化获得了纯度较高的重组BmNPV-POL蛋白。以poly(dA)/oligo(dT)为模板,比较在原核细胞和家蚕杆状病毒表达系统获得的重组BmNPV-POL蛋白的酶活性,结果表明在家蚕幼虫体内表达并纯化的重组BmNPV-POL的酶活性明显较高。利用家蚕杆状病毒表达系统简便、快速获得重组BmNPV-POL蛋白,有助于后续对BmNPV复制机制的研究。

关键词  DNA聚合酶; 家蚕杆状病毒表达系统; 重组蛋白; 酶活性