摘要  P25蛋白是家蚕（Bombyx mori）丝素蛋白的主要成分之一。根据BmP25基因ORF序列设计引物，以家蚕5龄第3天丝腺cDNA为模板，RT-PCR扩增获得BmP25的ORF全长片段。将构建的含BmP25的原核表达重组质粒转化大肠埃希菌Rosetta(DE3)菌株感受态细胞，对家蚕丝素P25蛋白进行重组表达和纯化，并免疫家兔制备获得多克隆抗体，用于研究家蚕丝腺中P25蛋白的合成和分泌规律。利用制备的多克隆抗体对家蚕品种大造5龄第3天幼虫9个组织的总蛋白质样品进行Western blot检测，结果在中部丝腺和后部丝腺检测到P25蛋白，表明该抗体有较好的特异性。进一步利用此多克隆抗体分别对家蚕5龄第5天幼虫中部丝腺和后部丝腺不同区域进行荧光免疫组化分析，结果在后部丝腺的细胞和腔内观察到明显的荧光信号，而中部丝腺后部的细胞仅有微弱信号，腔内的荧光信号强度随着丝素蛋白的从后向前运输越来越弱，以致在中部丝腺的前部和中部未检测到荧光信号。推测可能是P25蛋白在丝素蛋白从溶胶状态到凝胶状态的转化过程中，被逐步包裹在丝素蛋白聚合物中导致其不能被检测到。利用该多克隆抗体对家蚕不同品种的茧丝蛋白进行Western blot检测，均能获得特异性的杂交条带，表明该抗体还可用于家蚕茧丝及丝制品的分子检测鉴定，为开发丝制品的检测试剂盒提供了条件。

关键词  丝素蛋白； P25蛋白； 原核表达； 多克隆抗体； 免疫印迹分析； 荧光免疫组化