家蚕微孢子虫假定层粘连蛋白基因NbHLAMB4的克隆和序列分析及互作蛋白质筛选
摘要 层粘连蛋白是重要的细胞外基质成分之一,在基膜的构建及细胞的黏附等方面都有重要作用。通过检索微孢子虫数据库发现家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)存在假定层粘连蛋白基因NbHLAMB4,根据该基因序列设计引物,以家蚕微孢子虫基因组DNA为模板克隆了NbHLAMB4基因。该基因的开放阅读框(ORF)全长为1 104 bp,预测编码的蛋白质含有367个氨基酸,分子质量为43.74 kD,等电点为5.72。NbHLAMB4蛋白序列含有一个N-糖基化位点和Pfam:SAS-6_N结构域,无信号肽,也无跨膜结构域。应用酵母双杂交技术,以NbHLAMB4作为诱饵蛋白,通过筛选家蚕中肠cDNA文库,初步得到3个与NbHLAMB4互作的候选蛋白质,分别是家蚕热休克蛋白(Hsp40)、锌指蛋白420类似物(similar to zinc finger protein 420)、氨肽酶N(aminopeptidase N)。研究结果为阐明家蚕微孢子虫的侵染机制提供了新的线索。
关键词 家蚕微孢子虫; 假定层粘连蛋白; 基因克隆; 酵母双杂交技术; 互作蛋白质