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  • 国内刊号:CN 32-1115/S
  • 国际刊号:ISSN 0257-4799
  • 主管部门:中国科学技术协会
  • 主办单位:中国蚕学会
    中国农业科学院蚕业研究所
  • 主编:李木旺
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基于实时荧光定量PCR技术检测桑丁香假单胞菌

【期刊年份】2016年第02期
【作者姓名】包奇 曹梦琪 周雨 郑煜 李长龙 王海燕 王俊 盛晟 吴福安
【作者单位】江苏科技大学;中国农业科学院蚕业研究所;天津艾赛博生物技术有限公司;天津市药用植物细胞规模培养企业重点实验室

摘要  由桑丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae pv. mori,以下简称Psm)引起的桑疫病是一种毁灭性的桑树细菌性病害,建立对病原菌的早期检测技术,有利于及时制定病害的防控技术措施。依据致病性相关基因hrpZ的片段设计的一对引物能够在Psm中特异性地扩增出195 bp大小的条带,而用于对其他致病变种的丁香假单胞菌和其他种属病原菌的扩增则没有此条带。利用Psm14-7菌株基因组DNA为模板进行实时荧光定量PCR(qPCR)扩增,模板DNA质量浓度在6×10-56 ng/μL范围内与扩增所得Ct值呈现良好的线性关系,线性方程为y=-3.224 69x+14.034 45(R2=0.997 09),检测的最低限为(60±0.001 2fg/μL;以Psm14-7菌液为模板进行qPCR,菌液浓度在1×1021×108 CFU/mL范围内与Ct值呈现良好的线性关系,线性方程为y=-4.562 15x+46.911 67(R2=0.988 72),最低检测限为(102±0.008 3CFU/mL。于桑树植株人工接种Psm后不同时间,对出现各种症状植株中的菌群数量进行qPCR检测,结果显示:接种后的第48天可能为病原菌诱导桑树的过敏性反应和系统获得性抗性关键时期,影响到了Psm的增殖速度;能引起健康桑树暴发桑疫病的致病菌最低浓度为(1.5×108±0.076 8CFU/g。建立的qPCR检测方法,对由Psm引起的桑疫病的田间早期诊断和及时防控具有一定指导意义。

关键词  桑疫病; 桑丁香假单胞菌; hrpZ基因; 实时荧光定量PCR 早期诊断