家蚕N-乙酰基转移酶基因BmNAT的克隆与表达分析
摘要 Fox类转录因子在细胞生长、增殖、分化和胚胎发育等过程中发挥重要功能,SGF-1是家蚕丝腺细胞转录摘要 N-乙酰基转移酶(N-acetyltransferase,NAT)是昆虫体内一种催化乙酰基团在乙酰辅酶A和胺之间转移的酶,主要与色素沉积、生理节律等有关。对已公布的家蚕(Bombyx mori)N-乙酰基转移酶基因BmNAT(GenBank登录号:NP_001040401.1)进行生物信息学分析:该基因序列全长763 bp,ORF为564 bp,编码187个氨基酸残基,分子质量21.4 kD;多序列比对表明BmNAT与脐橙螟(Amyelois transitella)同源蛋白质的序列相似性最高。通过原核表达的方法制备了融合BmNAT蛋白,经蛋白质纯化并免疫新西兰兔获得多克隆抗体。亚细胞定位显示BmNAT主要存在于细胞质和细胞核中。利用Western blotting检测BmNAT在家蚕不同发育时期和5龄幼虫各组织器官的表达谱,结果表明BmNAT在蛾、卵期以及5龄幼虫的头部表达量较高,与BmNAT的qRT-PCR检测结果基本一致,初步推断BmNAT可能在家蚕的这些组织或发育时期发挥一定的生物学功能。流式细胞实验显示BmNAT对细胞周期可能存在一定的影响。
关键词 家蚕; N-乙酰基转移酶; 基因克隆; 原核表达; 时空表达谱; 亚细胞定位