Bm59基因缺失对家蚕核型多角体病毒(BmNPV)复制、转录及组装的影响
摘要 Bm59是家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV)的核心基因之一。利用λRed重组技术和Bac-to-Bac系统构建野生型病毒wtBacmid-polh-egfp、缺失型病毒Bm59ko-Bacmid-polh-egfp以及补回型病毒Bm59re-Bacmid-polh-egfp,并分别转染家蚕卵巢培养细胞BmN,研究Bm59基因在病毒侵染、增殖和组装中的功能。对病毒滴度的检测结果表明3种类型病毒都能产生有活力的子代病毒并使细胞感染发病,但Bm59ko-Bacmid-polh-egfp在各个时相的滴度值均显著低于其他2种类型病毒(P<0.05)。电子显微镜下观察Bm59ko-Bacmid-polh-egfp转染的细胞中只有少量细长的杆状病毒粒子,而其他2种类型病毒转染细胞后则能产生大量具有囊膜包裹的成熟病毒粒子。qRT-PCR检测结果显示,Bm59缺失型病毒基因组DNA的复制能力显著降低(P<0.05),早期基因lef-3、晚期基因vp39和极晚期基因p10的转录水平显著低于野生型病毒(P<0.05)。综上所述,Bm59基因虽然是家蚕核型多角体病毒复制的非必需基因,但会显著影响病毒的增殖速度和病毒粒子的组装,对病毒各个时期的基因转录水平具有下调作用。
关键词 家蚕核型多角体病毒; Bm59基因; λRed重组系统; Bac-to-Bac系统; qRT-PCR