摘要  青枯菌5号生理小种（Ralstonia solanacearum race 5）是引发桑青枯病的病原菌。为了改进常规PCR方法不能对活体病原菌进行准确鉴别和定量分析的不足，建立叠氮溴化丙锭（PMA）预处理结合荧光定量PCR（qPCR）检测青枯菌5号生理小种活菌的方法。该方法首先将待检测样品的病原菌细胞用质量浓度为15 ng/μL的PMA暗孵育10 min后，在卤钨灯下曝光5 min，以消除死菌细胞DNA的PCR扩增信号。用PMA-qPCR方法对含青枯菌5号生理小种活菌和死菌的混合样本的检测结果表明，死菌的存在不会对活菌细胞DNA的扩增产生影响。建立的PMA-qPCR标准曲线显示，在菌液浓度为10³～10⁷ CFU/mL 的范围内，qPCR循环阈值（Ct）与菌液浓度的对数值之间呈良好的线性关系，线性方程为y=-3.477x+47.489,R²=0.997。建立的PMA-qPCR方法能更为准确地检测复杂样本中的青枯菌5号生理小种活菌数量，有助于对桑树青枯病的早期诊断和及时制定病害防控措施。

关键词  桑树青枯病； 青枯菌5号生理小种； 叠氮溴化丙锭； 荧光定量PCR； 活细胞