摘要  由青枯劳尔氏菌（以下简称青枯菌）5号生理小种（Ralstonia solanacearum race 5）引起的桑青枯病是桑树的重大病害。采用荧光定量PCR(qPCR)技术对病原菌进行早期检测，为病害的预测预报及有效防控提供依据。从青枯菌差减基因文库筛选一对引物RS72F/RS312R，经PCR扩增试验及qPCR产物的熔解曲线分析验证其可特异性地扩增出青枯菌5号生理小种241 bp的基因片段。建立的qPCR标准曲线显示：以青枯菌5号生理小种基因组DNA为模板，在10^-4～10² ng/μL范围内，DNA质量浓度的对数值与扩增Ct值呈现良好的线性关系，线性方程为y=-2.747x+21.834，R²=0.993；以青枯菌5号生理小种菌液为模板，在10³～10⁷ CFU/mL范围内，菌液浓度的对数值与扩增Ct值呈现良好的线性关系，线性方程为y=-3.418x+45.447，R²=0.998。应用建立的qPCR检测方法对经青枯菌5号生理小种菌液处理的土壤样品进行检测，结果显示可检测出自然环境中存在的低于致病浓度的病原青枯菌，且用菌液处理灭菌土壤和不灭菌土壤的样品间青枯菌检测的Ct值无显著差异。建立的检测方法具有特异性强、灵敏度高、可定量的特点，适用于由青枯菌5号生理小种引起的桑青枯病的早期检测诊断。

关键词  青枯劳尔氏菌； 荧光定量PCR； 桑青枯病； 早期检测