摘要  为了研究家蚕miRNA对丝素蛋白基因表达的调控作用，采用生物信息学方法筛选获得对家蚕丝素轻链基因（BmFib-L）和P25蛋白基因（BmP25）有潜在调控作用的Bmo-miR-2755*。利用半定量RT-PCR技术分析Bmo-miR-2755*及其靶基因BmFib-L、BmP25在家蚕4～5龄期幼虫后部丝腺和5龄3 d幼虫不同组织器官中的表达水平，结果显示三者在后部丝腺组织中的表达水平都较高,呈现严格的时空特异性。以pcDNA3质粒为载体，构建Bmo-miR-2755*的重组表达载体pcDNA3[ie1-egfp-pri-miR-2755*-SV40]；以pGL3.0-Basic质粒为载体，分别构建BmFib-L 3′UTR、BmP25 3′UTR与荧光素酶报告基因luc融合的重组报告质粒pGL3.0[A3-luc-Fib-L-3′UTR-SV40]和pGL3.0[A3-luc-P25-3′UTR-SV40]。以海肾荧光素酶表达载体pRL-CMV为内参，分别将构建的Bmo-miR-2755*重组表达载体和2个重组报告质粒共转染BmN细胞，通过检测细胞中的荧光素酶活性，明确Bmo-miR-2755*可显著下调BmFib-L基因的表达，并能上调BmP25基因的表达，但上调作用未达显著水平。上述结果为研究家蚕miRNA的功能和阐明蚕丝蛋白基因表达调控分子机制提供了新的实验数据。

关键词  miRNA； 家蚕； Bmo-miR-2755*； 丝素轻链基因； P25基因； 表达调控