摘要  GP64是Ⅰ型杆状病毒的主要囊膜糖蛋白，利用基因重组技术在gp64中插入外源蛋白基因，二者在病毒表面融合表达活性肽或蛋白质，可以免去纯化表达产物的繁琐。L-天冬酰胺酶Ⅱ（ASP）是一种临床上广泛使用的蛋白类抗肿瘤药物，利用家蚕杆状病毒（BmNPV）GP64展示系统表面展示ASP，探讨以表面展示有ASP蛋白的出芽型病毒粒子(BV)生产抗肿瘤药物的可行性。构建重组转移载体pFastBacdual-gp64sp-asp-gp64ctd，并转化E. coli DH10Bac^TM，通过蓝白斑筛选获得重组杆粒DNA，将重组杆粒DNA通过脂质体转染至BmN细胞，获得了重组病毒。重组病毒大量感染BmN细胞后72 h，收集感染病毒的细胞培养液超速离心纯化BV。采用奈氏试剂法检测接种重组病毒的BmN细胞内表达融合ASP的酶活力为1 788.4 U/mg；Western blot检测纯化后的BV中含融合ASP蛋白，然而BV中的ASP检测不出酶活性。试验结果提示，构建的杆状病毒GP64展示系统可以将ASP转到BV上，但产物的活性保持有待进一步研究。

关键词  家蚕杆状病毒； GP64表面展示系统； L-天冬酰胺酶Ⅱ； 融合表达； BmN细胞