摘要  为了简便、快速、准确地检测家蚕核型多角体病毒（BmNPV），以BmNPV广西分离株的多角体蛋白基因（polh）序列（GenBank登录号:JQ991011.1）设计引物，以感染BmNPV（广西宜州分离株）2 h的5龄家蚕幼虫中肠组织提取的DNA为模板，建立二温式PCR检测BmNPV的方法，最终确定的最佳反应体系为：10×PCR buffer 1.5 μL，5 mmol/L MgCl₂ 2 μL，2.5 mmol/L dNTP 0.5 μL，10 μmol/L上、下游引物各1 μL，5 U/μL Taq DNA 聚合酶0.1 μL，18 ng/μL模板DNA 1 μL，加水至总体积15 μL。确定的最佳反应条件为：94 ℃预变性3 min；95 ℃ 15 s，延伸和退火温度合并为62 ℃ 30 s，共25个循环。按上述条件PCR扩增得到大小约309 bp的特异性片段，测序结果与已知polh基因序列的相似度为100%。与普通PCR检测方法比较，采用二温式PCR方法对样本的检测时间节省1.5 h，反应特异性强，灵敏度高（能被检测的最小感病组织基因组DNA的质量浓度为1.8 pg/μL），并且选择最初2 h感病的幼虫中肠组织为检测材料，因而可用于家蚕血液型脓病的早期诊断。

关键词  家蚕核型多角体病毒； 多角体蛋白基因； 二温式PCR； 反应条件