家蚕C型凝集素16基因(BmCTL 16)的电子克隆及序列特征和表达谱
摘要 C型凝集素是在动物先天免疫中发挥重要作用的模式识别受体。从家蚕杂交一代超亲表达的基因中筛选出一个C型凝集素16基因(BmCTL 16),通过电子克隆、序列拼接获得了总长度为1 105 bp的序列,其5′端和3′端分别为63 bp、385 bp,预测ORF为657 bp,在3′端终止密码子下游314 bp位置为加尾信号胞质多聚腺苷化特异因子(CPSF)结合位点。预测BmCTL 16编码218个氨基酸,组成蛋白质的氨基酸有20种,数量最多的是亮氨酸(有19个),蛋白质理论等电点(pI)6.65,分子质量25.124 4 kD。ScanProsite结构域预测BmCTL 16存在与其它鳞翅目昆虫CTL一样保守的糖蛋白识别位点CRD。系统进化分析表明BmCTL 16与烟芽夜蛾、小菜蛾、刺舌蝇、埃及伊蚊的同源CTL序列相似度均高达99%。对电子拼接序列进行RT-PCR验证,扩增片段的测序结果与电子克隆的BmCTL 16序列完全一致。qRT-PCR分析BmCTL 16在5龄第1~2天幼虫中肠组织中的表达量较高,之后呈现下降趋势,推测可能是家蚕5龄初期旺盛的生命活动提高了蚕体免疫功能。
关键词 家蚕; 先天免疫; C型凝集素16基因; 电子克隆; 序列分析; 基因表达