摘要  自噬是细胞固有的一种降解机制，在生物体的生长、发育以及感染免疫、衰老、死亡等过程中发挥重要作用。进行家蚕细胞自噬相关蛋白基因的克隆和重组蛋白表达，分析细胞自噬相关蛋白在5龄幼虫不同组织的表达水平和同一组织中随5龄发育时间的表达变化，有助于从分子水平了解家蚕细胞自噬的功能。根据GenBank登录的家蚕细胞自噬相关蛋白基因Atg8(BmAtg8)的序列设计引物，以家蚕5龄幼虫中肠cDNA为模板克隆了BmAtg8的354 bp编码区序列，并成功将其连入pET32a(+)质粒中。将重组质粒转化E. coli Rosseta菌株继而诱导表达重组BmATG8蛋白，将该蛋白质纯化后强化免疫新西兰大白兔3次，获得效价达1∶512 000的多克隆抗血清。以此多克隆抗体杂交家蚕组织总蛋白，检测到BmATG8及其与磷脂酰乙醇胺偶联的BmATG8-PE 2条免疫印迹条带。Western杂交表明BmATG8蛋白在家蚕5龄第2天幼虫丝腺、中肠和脂肪体中的表达水平较高，其中在5龄第1～2天和第7～8天丝腺组织的表达水平较高，说明家蚕5龄幼虫这3个组织尤其是这2个时间段的丝腺组织中细胞自噬活性极高，反映出家蚕变态发育前这些组织器官细胞内的代谢活动旺盛。

关键词  家蚕； 细胞自噬； BmATG8蛋白； 多克隆抗体； 组织表达