蓖麻蚕AGO1蛋白基因的克隆及序列与表达特征
摘要 小RNA介导的基因表达沉默机制在昆虫中非常保守。作为RNA诱导沉默复合体(RISC)的关键组分,Argonaute(AGO)蛋白家族成员在RNA干扰途径中起着关键性作用。以蓖麻蚕(Philosamia cynthia ricini)品种海蓝的幼虫头部cDNA为模板,利用RT-PCR和RACE技术克隆了一个编码AGO蛋白的基因,将该基因命名为pcr-AGO1(GenBank登录号:KJ676101)。该基因cDNA全长3 490 bp,包括182 bp的5′-UTR和572 bp的3′-UTR,ORF为2 736 bp,编码911个氨基酸,蛋白质分子质量为101.492 3 kD,等电点为9.31,蛋白质序列中含有AGO家族成员典型的PAZ结构域和PIWI结构域。实时荧光定量PCR检测pcr-AGO1基因在蓖麻蚕的幼虫期、蛹期、蛾期和卵期以及幼虫的头部、脂肪体、表皮、丝腺、中肠和血液等组织器官中均有表达。其中,在卵期的表达量最高,幼虫期最低,并且在除蚁蚕外的整个幼虫期的表达量没有太大变化;在幼虫各个组织中的表达量以表皮最高,中肠次之,在血液和头部的表达量都较低。研究结果提示,该基因可能在蓖麻蚕的整个发育期都发挥相应的功能,并可能参与幼虫表皮细胞的生长调控。
关键词 蓖麻蚕; AGO家族蛋白; 基因克隆; 序列特征; 表达谱; 实时荧光定量PCR