桑树肉桂酸-4-羟化酶基因(MmC4H)的克隆及在不同桑品种间的表达差异
摘要 肉桂酸-4-羟化酶(C4H)是植物苯丙烷类代谢途径中的关键酶之一,影响黄酮类等次生代谢产物的生物合成。利用RT-PCR和RACE技术,以鲁桑(Morus multicaulis)品种育71-1的桑树幼叶cDNA为模板克隆了桑树肉桂酸-4-羟化酶基因,命名为MmC4H(GenBank 登录号:KJ013408)。该基因cDNA序列长1 794 bp,1 518 bp的ORF编码505个氨基酸残基,蛋白质序列包含一个植物P450 保守区域,与包括川桑(Morus notabilis)在内的其它6种植物同源蛋白质序列的相似度达86%以上,其中与川桑同源序列的相似度达到98%。通过实时荧光定量PCR检测分析MmC4H在7个桑种的34个品种幼叶中的表达水平存在较大差异,并且该基因的表达水平与桑叶总黄酮含量有一定的相关性,供试华桑(Morus cathayana)和白桑(Morus alba)品种幼叶中的MmC4H表达水平及桑叶总黄酮含量均较高。
关键词 桑树; 肉桂酸-4-羟化酶; 基因克隆; 序列分析; 实时荧光定量PCR; 桑品种; 桑叶总黄酮