摘要  晚期表达因子12（late expression factor 12，LEF-12）是昆虫核型多角体病毒（nucleopolyhedrovirus，NPV）基因组编码的转录调控因子之一。为了研究家蚕核型多角体病毒（BmNPV）LEF-12的生物学功能，通过 Red 重组技术敲除BmNPV 的lef-12 基因，构建lef-12缺失型病毒lef12-ko-Bacmid，再利用 Bac-to-Bac 系统将lef-12重新补回到病毒基因组中，获得补回型病毒lef12-re-Bacmid。将野生型病毒wtBacmid、lef12-ko-Bacmid和lef12-re-Bacmid分别转染BmN细胞，发现3种病毒均可在转染的细胞中产生具有感染活性的病毒粒子，但病毒滴度测定结果显示lef12-ko-Bacmid的病毒粒子产量比wtBacmid下降了3倍左右，而lef12-re-Bacmid的病毒粒子产量基本上恢复到了野生型病毒的水平，表明lef-12的缺失会影响病毒在宿主细胞中的增殖。进一步研究lef-12敲除对病毒基因组复制和基因转录的影响，结果表明当lef-12缺失后，BmNPV DNA复制没有受到明显影响，说明lef-12不是病毒复制的必需基因；但lef-12缺失后，病毒晚期基因vp39、极晚期基因p10的转录水平均明显低于野生型和补回型病毒。透射电子显微镜观察结果也进一步证实lef-12缺失后，病毒仍能进行正常复制和装配，但与野生型病毒相比其增殖数量有所下降。上述研究结果提示：BmNPV lef-12不是病毒基因组复制的必需基因，但其缺失将导致宿主细胞的感病时间延迟，对病毒晚期和极晚期基因的转录也具有显著影响。

关键词  家蚕核型多角体病毒； lef-12基因； Red重组系统； Bac-to-Bac系统； 病毒复制； 基因转录