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  • 国内刊号:CN 32-1115/S
  • 国际刊号:ISSN 0257-4799
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  • 主办单位:中国蚕学会
    中国农业科学院蚕业研究所
  • 主编:李木旺
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家蚕化蛹初期血液中卵黄原蛋白BmVg的纯化和鉴定

【期刊年份】2014年第02期
【作者姓名】"罗娟
【作者单位】(家蚕基因组生物学国家重点实验室,农业部蚕桑学重点实验室,西南大学

摘要   卵黄原蛋白(vitellogeninVg)是昆虫血液中发现最早的蛋白质,对于昆虫的繁殖至关重要。以家蚕Vg基因(BmVg)的部分序列构建原核表达载体,转化E. coil BL21(DE3)菌株,在20 条件下用0.6 mmol/L IPTG进行诱导表达,表达产物经镍柱亲和层析纯化得到家蚕卵黄原蛋白BmVg的肽蛋白。以BmVg肽蛋白为抗原制备的兔源多克隆抗体效价>1512 000。采用硫酸铵分级沉淀和阴离子交换层析的纯化方法,从家蚕化蛹初期的血液中纯化获得天然的BmVg蛋白,并用制备的多克隆抗体进行Western blotting检测,鉴定此纯化的天然蛋白质为BmVg蛋白。建立的BmVg分离纯化技术将有助于进一步研究BmVg的合成、转运及利用机制。

关键词   家蚕;卵黄原蛋白;原核表达;分离纯化;免疫印迹法