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  • 国内刊号:CN 32-1115/S
  • 国际刊号:ISSN 0257-4799
  • 主管部门:中国科学技术协会
  • 主办单位:中国蚕学会
    中国农业科学院蚕业研究所
  • 主编:李木旺
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柞蚕微孢子虫全长cDNA文库的构建及EST分析

【期刊年份】2014年第02期
【作者姓名】"王勇
【作者单位】1沈阳农业大学植物保护学院;辽宁省昆虫资源工程技术研究中心,沈阳农业大学生物科学技术学院

摘要  柞蚕微粒子病的病原为柞蚕微孢子虫(Nosema pernyi)。采用SMART(switching mechanism at 5′-end of RNA transcript)技术构建柞蚕微孢子虫全长cDNA文库,初始文库滴度4.2×106 pfu/mL,文库容量1.0×107 pfu,重组率为98.39%。随机挑取32个克隆,经PCR检测插入的片段长度在750~3 000 bp之间,平均长度>1 000 bp。挑选文库中864个克隆进行表达序列标签(EST)测序,得到626条高质量的EST,拼接后得到197条单一基因(unigenes),包含64条重叠群(contigs)133条单一EST,冗余度为68.53%。将这些UnigenesNCBI数据库进行比对,146Unigenes在蜜蜂微孢子虫(Nosema ceranae)、家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)、兔脑炎微孢子虫(Encephalitozoon cuniculi)等的基因组中比对到同源基因。在随机EST测序中克隆获得一个孢子形成蛋白(sporulation protein)基因,命名为NpSP.1。该基因ORF长度为1 014 bp,编码337个氨基酸,蛋白质的理论分子质量为39.2 kD,等电点5.71。柞蚕微孢子虫cDNA文库的构建及EST测序的完成,为进一步发现和研究柞蚕微孢子虫的功能基因奠定了基础。

关键词  柞蚕微孢子虫; cDNA文库;表达序列标签;孢子形成蛋白基因