柞蚕微孢子虫全长cDNA文库的构建及EST分析
摘要 柞蚕微粒子病的病原为柞蚕微孢子虫(Nosema pernyi)。采用SMART(switching mechanism at 5′-end of RNA transcript)技术构建柞蚕微孢子虫全长cDNA文库,初始文库滴度4.2×106 pfu/mL,文库容量1.0×107 pfu,重组率为98.39%。随机挑取32个克隆,经PCR检测插入的片段长度在750~3 000 bp之间,平均长度>1 000 bp。挑选文库中864个克隆进行表达序列标签(EST)测序,得到626条高质量的EST,拼接后得到197条单一基因(unigenes),包含64条重叠群(contigs)和133条单一EST,冗余度为68.53%。将这些Unigenes与NCBI数据库进行比对,146条Unigenes在蜜蜂微孢子虫(Nosema ceranae)、家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)、兔脑炎微孢子虫(Encephalitozoon cuniculi)等的基因组中比对到同源基因。在随机EST测序中克隆获得一个孢子形成蛋白(sporulation protein)基因,命名为NpSP.1。该基因ORF长度为1 014 bp,编码337个氨基酸,蛋白质的理论分子质量为39.2 kD,等电点5.71。柞蚕微孢子虫cDNA文库的构建及EST测序的完成,为进一步发现和研究柞蚕微孢子虫的功能基因奠定了基础。