摘要 采用基因打靶技术对家蚕丝素蛋白基因(fib)进行分子设计与遗传改造，探讨从基因水平改良蚕丝性能的可行性。以家蚕丝素轻链基因(fib-L)终止密码子TAA上游1.2 kb (fib-LL)和下游0.5 kb(fib-LR)片段作为基因打靶载体的左右同源臂，将绿色荧光蛋白基因(gfp)插入到两同源臂的中间，并使其与fib-L基因处于同一读码框，构建基因打靶载体pSK-FibL-L-GFP-FibL-R。将该载体质粒转染BmN细胞后，荧光显微镜下观察细胞呈现绿色荧光，表明载体构建成功。将该载体质粒通过精子介导法导入家蚕品种高白的卵，在G0代筛选出茧呈绿色荧光的家蚕，并通过PCR检测证实其为转基因家蚕；用GFP抗体对G3代转基因家蚕幼虫后部丝腺组织进行Western blotting检测，有分子质量为65 kD的Fib-L-GFP融合蛋白特异性条带呈现。转基因家蚕所产蚕丝在蓝光的激发下发出绿色荧光，表明通过基因打靶将gfp导入了家蚕丝素轻链基因中，并成功实现融合表达。

 

关键词 家蚕； 基因打靶； 绿色荧光蛋白基因； 丝素轻链基因； 融合表达