摘要 酪氨酸羟化酶作为儿茶酚胺类合成的限速酶，是人类、哺乳动物和昆虫新陈代谢不可或缺的酶类。以家蚕(Bombyx mori)酪氨酸羟化酶(BmTH)为研究对象，分析其氨基酸位点突变对酶结构与活性的改变，为研究酪氨酸羟化酶的功能位点以及表达调控提供依据。利用重叠延伸PCR技术将BmTH蛋白质序列的第394位氨基酸残基组氨酸(His³⁹⁴)突变为谷氨酰胺(Gln)，成功获得家蚕酪氨酸羟化酶突变型BmTH-H394Q。BmTH-H394Q的活性仅为野生型BmTH活性的38%，且其热稳定性降低，易于聚沉；荧光光谱分析His³⁹⁴突变为Gln使酪氨酸羟化酶的色氨酸和疏水基团暴露增多；圆二色光谱分析显示BmTH-H394Q的α-螺旋结构含量减少了9.6个百分点，而β-折叠结构含量上升了8.0个百分点。据此可以推测，BmTH的氨基酸位点His³⁹⁴对酶的活性和结构稳定性起着重要作用，是维持其结构和功能所必需的基团。

关键词 家蚕；酪氨酸羟化酶；定点突变；活性；结构；稳定性