蓖麻蚕乙酰胆碱酯酶基因(Pcrace2)的克隆及序列与表达分析
【期刊年份】2013年第03期
【作者姓名】刘娟 张月华 张华光 高丽 钱荷英 孙平江 徐安英
【作者单位】江苏科技大学;中国农业科学院蚕业研究所
摘要 昆虫乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE,EC 3.1.1.7)是有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂的作用靶标。利用RT-PCR 和RACE技术从蓖麻蚕(Philosamia cynthia ricini)幼虫头部组织克隆了乙酰胆碱酯酶基因(Pcrace2)。该基因cDNA全长为2 051 bp,包含1 497 bp的ORF,编码498个氨基酸,蛋白质的分子质量为56.25 kD,等电点(pI)为5.11,含有由23个氨基酸组成的前体信号肽,推测为分泌型蛋白质。基于PcrAChE2同源氨基酸序列的系统进化分析表明:蓖麻蚕与小菜蛾(Plutella xylostella)、棉铃虫(Helicoverpa armigera)、烟青虫(Helicoverpa assulta)的亲缘关系最近,与家蚕(Bombyx mori)和野桑蚕(Bombyx mandarina)的亲缘关系也比较近。利用Real-time PCR方法分析Pcrace2基因在蓖麻蚕5龄第3天幼虫的头部、脂肪体、丝腺、中肠和血液中均有表达,以头部的表达量最高;在蓖麻蚕不同发育时期,Pcrace2在蛾期的表达量明显高于其它发育时期,在5龄幼虫期的表达量最低。研究结果有助于进一步分析蓖麻蚕乙酰胆碱酯酶基因的功能。
关键词 蓖麻蚕;乙酰胆碱酯酶;基因克隆;序列特征;表达谱;实时定量PCR