摘要 构建一种红色荧光蛋白基因稳定转化的家蚕细胞株，用于检测细胞是否被家蚕核型多角体病毒(BmNPV)感染和快速、便捷地测定BmNPV滴度。首先构建BmNPV多角体蛋白基因(polh)启动子驱动的红色荧光蛋白基因(DsRed)表达盒，然后将该表达盒克隆至 pIZT/V5-His中构建稳定转化载体pIZT-DsRed并转染家蚕卵巢上皮细胞BmN，经过终浓度为300 μg/mL的博莱霉素(zeocin)筛选3个月后，最终获得DsRed稳定转化的家蚕细胞株BmN-RFP。当该细胞株感染BmNPV后，由于病毒晚期表达因子的活化引发polh启动子控制的DsRed表达，在荧光显微镜下可以观察到感染病毒的细胞发出红色荧光，因而BmN-RFP可用来指示BmNPV感染的细胞。利用BmN-RFP细胞株，采用终点稀释法仅用3 d时间即可完成BmNPV滴度的测定。

关键词 红色荧光蛋白；家蚕卵巢上皮细胞；家蚕核型多角体病毒；病毒滴度；稳定转化