摘要 家蚕核型多角体病毒(BmNPV)表达载体系统可以利用线性化技术或通过Bac-to-Bac系统构建重组病毒。为了解决采用这些方法构建重组病毒需要多步克隆和筛选，无法满足实验室水平快速和高通量表达目的蛋白质需求的问题，建立了一种快速便捷的重组病毒构建方法。首先以BmNPV基因组为基础构建家蚕杆状病毒穿梭载体BmBacmid，进而利用Red重组技术敲除病毒复制必需基因orf1629的部分序列，构建了一种复制缺陷型BmNPV穿梭载体RD-BmBacmid。利用RD-BmBacmid单独转染或者与pBacPAK8-AcGFP共转染BmN细胞，证实了该载体的复制缺陷性，即需经同源重组修复orf1629基因后方可产生重组病毒。利用复制缺陷型BmNPV载体正筛选可以快速构建重组病毒表达目的蛋白质。

关键词 家蚕杆状病毒穿梭载体；Red重组；复制缺陷型；转染；正筛选