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利用基因组编辑技术TALEN在家蚕丝腺表达贻贝足丝蛋白Mfp-3
摘要 贻贝足丝蛋白Mfp-3是构成贻贝足丝的重要成分,在医学材料方面具有广阔的应用前景,而家蚕丝腺生物反应器是外源蛋白Mfp的理想表达系统。利用基因组编辑技术TALEN对家蚕丝素轻链基因BmFibL的终止密码子TAA处进行编辑,定点融合Mfp-3的编码序列,构建了BmFibL-Mfp-3定点融合表达系统。通过qRT-PCR和Western blotting验证了Mfp-3在家蚕后部丝腺及茧层内的特异性表达,Mfp-3的表达导致内源丝素蛋白BmFibL、BmFibH的表达量下调,以及纯合体全茧量和茧层率下调。对Mfp-3转基因家蚕的蚕丝纤维进行力学性能分析,显示Mfp-3的表达能够使蚕丝的延展性增加27.02%。以上结果表明,BmFibL融合表达系统能够实现Mfp-3在家蚕丝腺内的表达、分泌,Mfp-3的表达影响内源丝素蛋白的表达,能够有效提升蚕丝纤维延展性。