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N2/CO2厌氧胁迫下桑叶中γ-氨基丁酸含量与谷氨酸脱羧酶基因表达变化
摘要 探究N2与CO2厌氧胁迫对桑树γ-氨基丁酸(GABA)及其他氨基酸代谢的影响,分析谷氨酸脱羧酶(GAD)活性及GAD基因家族的表达,为富含GABA的桑叶功能性产品的开发优选厌氧处理方式及桑树GAD基因(MaGAD)的功能研究提供参考依据。以蒙桑(Morus mongolica Schneid.)和山桑(Morus bombycis Koidz.)鲜叶为材料,分别进行N2和CO2厌氧处理,通过高效液相色谱(HPLC)进行靶向氨基酸组学测序,测定GAD酶活性,并基于生物信息学鉴定MaGAD家族成员及其靶向miRNA,结合qRT-PCR分析MaGAD基因在低氧胁迫下的表达。结果显示,厌氧胁迫下,N2处理显著提升了桑叶中GABA及其他氨基酸的含量,效果优于CO2处理;GAD酶活性在不同桑树品种中因品种自身特性而异;对桑树GAD家族基因进行生物信息学分析,一共鉴定到3个桑树GAD家族成员,其启动子包含光、激素及胁迫响应元件,表达具有组织特异性,且受130个miRNA潜在调控;qRT-PCR检测山桑的MaGAD1和MaGABA-T2基因在低氧胁迫下响应更显著,而MaGAD2表达量与对照无显著差异,且N2处理下基因表达量高于CO2处理。上述结果表明,N2和CO2厌氧处理均能提高桑叶中GABA及其他氨基酸的含量,N2处理下氨基酸含量变化趋势更为显著,MaGAD基因在N2处理下表达量高于CO2处理。研究结果为筛选最佳厌氧胁迫方式开发富集GABA的桑产品及MaGAD基因功能研究提供了一定的理论基础。