摘要  以桑品种云桑2号的健康叶片为材料，通过反转录PCR结合RACE方法克隆到桑树几丁质酶基因Machi1（GenBank登录号：MK783295）。Machi1基因的完整ORF序列长度为972 bp，编码323个氨基酸残基，预测Machi1蛋白分子质量为34.9 kD，理论等电点（pI）为6.84。结构分析显示Machi1蛋白含有一个信号肽，无跨膜结构域。Machi1蛋白属于糖苷水解酶19家族，含有保守的ChtBD1结构域，预测具有几丁质酶活性。多序列比对结果表明，Machi1蛋白与川桑几丁质酶Mnchi19一致性最高为93.5%，系统进化树结果与之相一致。组织表达模式分析结果表明，Machi1基因在桑树叶片中的表达量最高。随后通过原核表达系统获得了重组目的蛋白并进行了纯化，用纯化的蛋白质免疫新西兰大白兔制备Anti-Machi1多克隆抗体。利用间接ELISA法测定其效价在1∶80 000以上，并经Western blotting验证了该多克隆抗体的特异性，为后续研究Machi1的抗病机制及生物学功能奠定了基础。