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家蚕30K蛋白新成员Slp的基因克隆及表达特征与亚细胞定位
【期刊年份】2013年第02期
【作者姓名】李擎 于威 姚玉华 全滟平 聂作明 张耀洲
【作者单位】浙江理工大学生物化学研究所；浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室
【作者姓名】李擎 于威 姚玉华 全滟平 聂作明 张耀洲
【作者单位】浙江理工大学生物化学研究所；浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室
摘 要 家蚕30K蛋白是家蚕生长发育的主要能源物质，具有多种生物学功能。根据已知的30K蛋白的氨基酸序列，利用NCBI在线BLAST程序在家蚕蛋白质数据库中进行氨基酸序列相似性比对分析，发现一条新的氨基酸序列，命名为Slp蛋白(GenBank登录号：NM_001126256)。该蛋白质与已知的5种家蚕30K蛋白的氨基酸序列相似度达41%以上，且具有共同的保守结构域Lipoprotein_11，三级结构也极其相似，推测Slp蛋白可能是家蚕30K蛋白家族新成员。利用NCBI在线工具查找获得了编码Slp的基因序列，然后利用RT-PCR技术从家蚕5龄幼虫脂肪体中克隆得到Slp的cDNA序列，并在大肠杆菌中诱导表达。利用获得的纯化Slp蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体，对该蛋白质进行亚细胞定位的结果显示其主要存在于BmN细胞的细胞膜上和细胞质中。Western blotting检测Slp蛋白在家蚕不同发育时期均有表达，以5龄幼虫期的表达量最高，蛹期次之，蛾期和卵期最低；在5龄幼虫不同组织均有表达，以血淋巴和脂肪体中的表达量最高，在其它组织中的表达量较低。依据Slp蛋白的序列结构与表达特征，推测其与已知的家蚕30K蛋白具有相似的多种生物学功能。
关键词 家蚕； 30K蛋白；基因克隆；序列特征；原核表达；组织分布；亚细胞定位