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- 国内刊号：CN 32-1115/S
- 国际刊号：ISSN 0257-4799
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- 主办单位：中国蚕学会
中国农业科学院蚕业研究所 - 主编：李木旺
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家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂5的多克隆抗体制备及组织表达分析
【期刊年份】2013年第02期
【作者姓名】李国胜 王彦云 王明慧 徐开遵 陈玉华 沈卫德 许雅香
【作者单位】现代丝绸国家工程实验室；苏州大学基础医学与生物科学学院；苏州大学蚕桑研究所
【作者姓名】李国胜 王彦云 王明慧 徐开遵 陈玉华 沈卫德 许雅香
【作者单位】现代丝绸国家工程实验室；苏州大学基础医学与生物科学学院；苏州大学蚕桑研究所
摘 要 为探讨家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂5(Serpin-5)的功能，制备其多克隆抗体并分析该蛋白质在家蚕组织中的表达特征。克隆获得去除信号肽的家蚕serpin-5 基因，该基因大小为1 140 bp，编码379个氨基酸残基，预测蛋白质分子质量42.6 kD，等电点6.02。构建用于原核表达的pET28a-serpin-5载体，并在E.coli BL21中进行重组蛋白的诱导表达。经SDS-PAGE分析表明重组家蚕Serpin-5蛋白多以包涵体的形式存在，纯化后的融合蛋白的分子质量与预测值相符。以此为抗原免疫昆明小鼠，Western blot检测制备的多克隆抗体具有较高的特异性，ELISA检测该多抗对免疫抗原的效价达到1∶24 000。在制备高效价抗体的基础上，通过Western blot 检测家蚕Serpin-5蛋白在5龄第3天幼虫精巢、卵巢中的表达量较高，中肠次之，在丝腺、马氏管、脂肪体中的表达量较低。推测家蚕Serpin-5蛋白在生殖腺中的高表达可能与家蚕的生殖功能相关。
关键词 家蚕；丝氨酸蛋白酶抑制剂；原核表达；多克隆抗体；组织表达