摘要  为了探究家蚕中miRNA对丝素蛋白轻链基因(BmFib-L)表达的调控作用，以BmFib-L 3′ UTR序列为靶序列，用RNAhybrid软件在线预测miRBase数据库中对靶基因具有调控作用家蚕miRNA，筛选到1个候选miRNA bmo-miR-3385-3p；采用荧光定量方法分析miR-3385-3p 在幼虫5龄第1～7天后部丝腺和5龄第3天不同组织及BmFib-L在5龄第1～7天

后部丝腺的表达水平；构建miR-3385-3p表达载体pcDNA3.0 (ie1-egfp-pre-miR-3385-3p-SV40)和含萤火虫荧光素酶报告基因的BmFib-L 3′ UTR重组质粒pGL3.0 (A3-luc-BmFib-L-3′ UTR-SV40)，并人工合成miR-3385-3p的模拟物（mimic）和抑制物（inhibitor），以海肾荧光素酶表达载体pRL-CMV为内参，共转染BmN细胞，利用双荧光素酶检测系统验证miR-3385-3p对BmFib-L表达的调控作用。同时，对预测的BmFib-L 3′ UTR上miR-3385-3p的靶位点进行了突变，在BmN细胞中进行了验证。进一步采用丝腺离体培养瞬时表达和5龄幼虫体腔注射转染物的方法，通过荧光定量分析后部丝腺靶基因表达水平的变化，验证miR-3385-3p在家蚕体内对BmFib-L表达的调控作用。结果表明，miR-3385-3p和BmFib-L在后部丝腺都有较高的表达水平，miR-3385-3p具备调控BmFib-L的可能性；在BmN细胞中miR-3385-3p对BmFib-L的表达具有显著抑制作用，预测的靶位点突变后miR-3385-3p对 BmFib-L基因的表达没有抑制作用。在离体培养丝腺中和幼虫体内miR-3385-3p都显著下调BmFib-L基因的表达。由此证明，BmFib-L是miR-3385-3p的靶基因之一，miR-3385-3p可抑制BmFib-L的表达。