桑树miR858及MYB转录因子基因在桑椹花青素合成过程中的表达分析
摘要 为探究桑树miR858及其靶向MYB转录因子基因调控桑椹花青素合成的分子机制,利用生物信息学、5′-RACE及qRT-PCR技术进行分析,使用在线网站预测,发现在桑树MYB基因家族中存在9个miR858靶基因,均为R2R3-MYB型基因,其中6个在降解组测序结果中能够被miR858靶向切割;5′-RACE技术对MYB5-1进行验证,发现切割位点位于与miRNA互补序列的第11至第12位碱基之间。对靶基因互补区进行分析发现miR858靶向区域为R3结构域中的T区,该区域核苷酸序列在第3、6、12、15、18位存在差异,但氨基酸序列一致,其切割位点具有保守性。运用Pearson对MYB与花青素合成关键基因表达进行相关性分析,发现MYB与花青素合成关键基因存在显著相关。qRT-PCR分析结果表明,miR858在黑、白桑椹的3个发育阶段表达上升,而MYB5-1基因在黑、白桑椹中的表达水平均呈现下降的趋势,二者呈现相反的表达趋势。由此推测miR858可能通过抑制MYB5-1的表达从而调控桑椹花青素合成。本研究确定了桑树中MYB5-1为miR858作用的靶基因之一,分析了MYB5-1与花青素合成关键基因的相关性,从分子角度探究桑树miR858及靶基因MYB在桑椹花青素合成过程中的调控机制,为进一步探索桑椹花青素合成以及代谢过程提供相关数据支持。