家蚕人工饲料来源毕赤酵母菌的分离及对饲料酸碱度的影响
摘要 为探明真菌繁殖对家蚕人工饲料酸碱度的影响,采用常规分离纯化技术,从人工饲料育养蚕环境的蚕座上获得 1 株可碱化饲料的真菌,经形态学和 ITS 序列鉴定,为库德里阿兹威氏毕赤酵母(Pichia kudravzevii)。该菌株接种至家蚕人工饲料,使饲料 pH 在 5 d 内由初始值上升至 7.54;接种至不同 pH 和葡萄糖含量的液体 YPD 中,其能适应繁殖基质 pH 的变化,碱化培养基质,使酸性培养基 pH 在 6 h 内升高,在 24 h 内上升到 7.86(pH 5.00)和 8.26(pH 6.00);培养基质中葡萄糖含量影响碱化,低浓度葡萄糖(<0.6%)培养基碱化现象明显,高浓度葡萄糖(>1.2%)培养基碱化现象消失。菌株接种至 pH 为 3.00、5.00 和 7.00 的不含葡萄糖 YPD 培养基中培养不同时间,对环境中氨气释放量、碱化相关基因表达及谷氨酸脱氢酶活性进行研究,结果表明,与添加 2%葡萄糖相比,固体培养基中氨气释放量在培养 24 h(pH 5.00)和 4 h(pH 7.00)时极显著上升(P<0.01),随后持续升至最高值 280 mg/m3(pH 7.00);谷氨酸脱氢酶活性逐渐升高,在 12 h(pH 5.00)和 24 h(pH 7.00)时达到最大值 53.84 U/mL 和 24.84 U/mL,极显著高于对照组(P<0.01);液体培养基中碱化相关基因 GDH2、DUR1,2 和 ATO3 表达水平呈先升高后降低趋势,GDH2 转录水平分别在 8 h(pH 3.00)、4 h(pH 5.00)和 8 h(pH 7.00)上调最高,极显著高于对照组(P<0.01),随后下降,ATO3 转录水平分别在 4 h(pH 3.00)、12 h(pH 5.00)和 8 h(pH 7.00)显著上调,且最高(P<0.05),然后下降,DUR1,2转录水平均在 8 h 极显著高于对照组(P<0.01)。添加抗霉素A,碱化程度下降甚至消失。该研究可为解明家蚕人工饲料的保鲜机制及研发保鲜技术提供参考。