柞蚕核型多角体病毒IAP2亚细胞定位分析及其基因缺失对病毒复制的影响
摘要 柞蚕核型多角体病毒(AnpeNPV) IAP2 属杆状病毒IAP-2类型蛋白,在病毒复制中的作用尚不清楚。本研究用RLM-RACE法分析Anpe-iap2基因的转录起始位点和终止位点,结果显示其转录起始位点位于ATG上游-4 nt,处于晚期基因启动子基序TAAG中;基因转录终止于TGA下游219 nt处,推算Anpe-iap2基因cDNA序列全长为952 bp。基因表达分析证实Anpe-iap2为病毒晚期表达基因。利用同源重组方法构建了Anpe-IAP2和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合表达的AnpeNPV重组病毒,共聚焦显微镜确定Anpe-IAP2在细胞质和细胞核中均有分布,以细胞核分布较多。利用λ-Red重组技术构建Anpe-iap2基因缺失型重组AnpeNPV,定量PCR检测结果表明缺失Anpe-iap2基因的重组AnpeNPV在Tn-Hi5细胞中的复制能力明显受到抑制,在柞蚕蛹中产生出芽型病毒粒子(BV)的数量显著减少。研究结果显示Anpe-iap2基因对AnpeNPV的复制和感染有重要作用,为深入了解AnpeNPV基因的功能和特性提供了新的依据。