摘要  利用柞蚕核型多角体病毒表达载体系统(AnpeNPV expression vector system)在柞蚕蛹体内分泌表达柞蚕溶菌酶(ApLz)，并建立重组蛋白的分离纯化方法。选用柞蚕30 kD蛋白信号肽构建分泌型转移表达载体pApBacDual-N1/L21Ap30kDSP，将Aplz基因克隆至该载体中，重组DNA转化感受态细胞DH10B/AnpeBacΔcc，通过抗生素抗性及蓝白斑筛选获得重组杆粒AnpeBac^Δcc/phAplz，并经PCR检测确认。重组杆粒DNA转染Tn-Hi5细胞后得到具有感染性的重组病毒Anpe-NPV^Δcc/phAplz。重组病毒感染柞蚕蛹6～7 d后收集柞蚕蛹血淋巴，利用His-tag Purification Resin和StrepTrap HP亲和层析柱对重组ApLz进行两步分离纯化。重组ApLz经SDS-PAGE和Western blot鉴定、蛋白质N端测序分析以及抗菌活性检测，结果显示，重组ApLz可以通过AnpeNPV表达载体系统在柞蚕蛹中得到分泌表达，经过两步层析分离得到的重组ApLz纯度较高，信号肽切割位点与预测相符，纯化的重组ApLz对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌具有良好的抑菌活性。初步研究结果为利用柞蚕蛹规模化制备重组蛋白提供了依据。