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  • 国内刊号:CN 32-1115/S
  • 国际刊号:ISSN 0257-4799
  • 主管部门:中国科学技术协会
  • 主办单位:中国蚕学会
    中国农业科学院蚕业研究所
  • 主编:李木旺
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基于SYBR Green Ⅰ的桑树皱叶病毒qPCR检测方法的建立及应用

【期刊年份】2020年第02期
【作者姓名】孙鑫1  张健1,2  杨磊1  卢全有1,2
【作者单位】1江苏科技大学生物技术学院;2中国农业科学院蚕业研究所,农业农村部蚕桑遗传改良重点实验室

摘要  根据桑树皱叶病毒(mulberry crinkle leaf virus,MCLV) cp基因的核苷酸序列,设计了3对用于实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)的引物,以含有cp基因全长序列的重组质粒为模板,通过PCR和熔解曲线分析筛选出1对适合用于qPCR的特异性引物。以10倍梯度稀释的含有cp基因全长序列的重组质粒为模板,进行SYBR Green Ⅰ qPCR并制作标准曲线,建立了MCLV的qPCR检测方法。该方法对MCLV cp基因的检测灵敏度≥47.8个拷贝/μL。利用建立的qPCR方法对大田样品进行检测,结果显示15个样品都为MCLV感染阳性,其中病毒含量最高的样品的病毒拷贝数为5.26×104 个拷贝/μL,最低的样品为8.36×102 个拷贝/μL。MCLV qPCR检测体系的建立可以为培育健康桑树种苗、预防病毒病的发生提供精准保障技术,也为研究桑树不同生长时期或不同组织中病毒滴度变化奠定了基础。

关键词  桑树皱叶病毒; SYBR GreenⅠ; 实时荧光定量PCR(qPCR); 检测; 灵敏度