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  • 国内刊号:CN 32-1115/S
  • 国际刊号:ISSN 0257-4799
  • 主管部门:中国科学技术协会
  • 主办单位:中国蚕学会
    中国农业科学院蚕业研究所
  • 主编:李木旺
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桑源阴沟肠杆菌LAMP检测方法的建立和应用

【期刊年份】2019年第03期
【作者姓名】杨宏宇1  周轶楠1  孙勋勋1  王亚洁1  王狗旦1  陈杰湖2  易辉玉1  刘伟强1  黄志君1  田铃1  刘吉平1
【作者单位】1华南农业大学动物科学学院;2广州瑞科基因科技有限公司

摘要  桑源阴沟肠杆菌是引起桑树发生枯萎症状的重要病原之一。对桑源阴沟肠杆菌全基因组序列进行分析,得到桑源阴沟肠杆菌特异基因序列,并以该特异基因序列为靶序列,设计筛选合适的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)引物组,通过荧光扩增曲线法、PCR产物琼脂糖凝胶电泳法及PCR产物SYBR Green I染色法3种判定方法优化反应体系,进而建立桑源阴沟肠杆菌LAMP检测技术和产品。采用Yt4引物组,在60 ℃、外内引物浓度比为1∶10的最优反应条件下,桑源阴沟肠杆菌阳性质粒检测灵敏度为2.5×106拷贝/μL。在特异性实验中,桑源阴沟肠杆菌菌株的阳性反应能产生S型荧光扩增曲线,电泳法可得到梯形条带,染色法反应液变为绿色,而在其他供试菌株及阴性对照中均未发生这些现象。应用建立的LAMP检测法和普通PCR方法分别对来自4个不同地区的11个桑树枯萎症状样品进行同步平行检测,2种方法的检测结果一致,但LAMP检测法更简单、快捷和灵敏。建立的桑源阴沟肠杆菌LAMP检测方法,为桑源阴沟肠杆菌的快速检测及桑树枯萎病的诊断提供了新技术。

关键词  桑源阴沟肠杆菌; 环介导等温扩增技术; 检测