摘要  美国白蛾（Hyphantria cunea）是危害桑树的主要害虫之一。为明确苏云金杆菌（Bacillus thuringiensis，Bt）杀虫晶体蛋白Cry对其作用机制，克隆美国白蛾中肠碱性磷酸酶基因，并对其编码蛋白的时空表达特异性及与Bt Cry1Ab35、Cry1Ac和Cry9Ea10的结合特性进行分析。根据美国白蛾中肠转录组数据获得碱性磷酸酶基因序列，设计特异引物，PCR扩增得到美国白蛾中肠碱性磷酸酶基因全长，命名为hcalp1（GenBank登录号为 MH796758）。该基因开放阅读框为1 629 bp，编码542个氨基酸，预测蛋白质分子质量和等电点分别为60.413 kD和5.83。实时荧光定量PCR和Western blot结果表明，hcalp1在美国白蛾4龄幼虫表达量最高,HcALP1蛋白在4龄幼虫中肠中的表达量也最高。构建原核重组表达载体pET30a-hcalp1，IPTG诱导表达获得分子质量约为70 kD的重组HcALP1蛋白；将Bt Cry1Ab35、Cry1Ac和Cry9Ea10原毒素分别经胰蛋白酶消化后与HcALP1重组蛋白进行体外配体印迹试验，发现HcALP1重组蛋白可与Bt Cry1Ab35、Cry1Ac和Cry9Ea10发生特异结合，推测HcALP1可能为3种Bt蛋白的中肠受体蛋白。