摘要  美国白蛾(Hyphantria cunea)是桑树的重要害虫。为明确苏云金杆菌（Bacillus thuringiensis）杀虫晶体蛋白对该虫的作用机制，利用已知昆虫氨肽酶N基因序列设计引物，以美国白蛾中肠cDNA为模板，利用RACE-PCR技术获得美国白蛾中肠氨肽酶N基因hcapn1全长序列（GenBank登录号:KP053647）。该基因开放阅读框为3 000 bp，编码999个氨基酸，预测蛋白质的分子质量和等电点分别为113.14 kD和4.85。设计去信号肽引物PCR扩增获得hcapn1基因序列，构建原核重组表达载体pET30a-hcapn1，诱导表达的HcAPN1重组蛋白约110 kD。将苏云金杆菌Cry1Ac、Cry2Ab33和Cry9Ea6原毒素经胰蛋白酶消化后与HcAPN1重组蛋白分别进行体外配体印迹试验，发现HcAPN1重组蛋白与Cry9Ea6结合，而不与Cry2Ab33、Cry1Ac发生特异结合，推测HcAPN1可能为Cry9Ea6在美国白蛾中肠的受体蛋白。分别设计引物扩增HcAPN1蛋白2个结构域Asp₃₄～Asp₅₂₇和Leu₅₆₃～Gln₉₂₅的编码序列，在大肠埃希菌中表达获得62 kD和48 kD 2种重组蛋白，体外结合试验显示Cry9Ea6与HcAPN1的结合发生在Leu₅₆₃～Gln₉₂₅之间。研究结果为深入理解苏云金杆菌Cry9Ea6蛋白对美国白蛾的杀虫机制提供了基础数据。