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国内刊号:CN 32-1115/S
国际刊号:ISSN 0257-4799
主管部门:中国科学技术协会
主办单位:中国蚕学会
             中国农业科学院蚕业研究所
主 编:郭锡杰
编辑部主任:魏幼平
刊社地址:江苏省镇江市四摆渡
             中国农业科学院蚕业研究所
邮政编码:212018
电 话:0511-85616835
传 真:0511-85616835
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美国白蛾中肠碱性磷酸酶HcALP1与苏云金杆菌3种Bt蛋白的体外结合特性分析
【出版年份】
2019年第3期
【资助项目】
国家现代农业产业技术体系建设专项(No.CARS-13),河北省自然科学基金项目(No.C2017204072),河北省科技计划项目(No.16236810D)。
【作者姓名】
常梦颖 赵丹 张雅昆 徐畅 陆秀君 郭巍
【作者单位】
1河北农业大学植物保护学院,河北 保定071001;2河北省核桃工程技术研究中心,河北 保定071001

摘要  美国白蛾(Hyphantria cunea)是危害桑树的主要害虫之一。为明确苏云金杆菌(Bacillus thuringiensisBt)杀虫晶体蛋白Cry对其作用机制,克隆美国白蛾中肠碱性磷酸酶基因,并对其编码蛋白的时空表达特异性及与Bt Cry1Ab35Cry1AcCry9Ea10的结合特性进行分析。根据美国白蛾中肠转录组数据获得碱性磷酸酶基因序列,设计特异引物,PCR扩增得到美国白蛾中肠碱性磷酸酶基因全长,命名为hcalp1GenBank登录号为 MH796758)。该基因开放阅读框为1 629 bp,编码542个氨基酸,预测蛋白质分子质量和等电点分别为60.413 kD5.83。实时荧光定量PCRWestern blot结果表明,hcalp1在美国白蛾4龄幼虫表达量最高,HcALP1蛋白在4龄幼虫中肠中的表达量也最高。构建原核重组表达载体pET30a-hcalp1IPTG诱导表达获得分子质量约为70 kD的重组HcALP1蛋白;将Bt Cry1Ab35Cry1AcCry9Ea10原毒素分别经胰蛋白酶消化后与HcALP1重组蛋白进行体外配体印迹试验,发现HcALP1重组蛋白可与Bt Cry1Ab35Cry1AcCry9Ea10发生特异结合,推测HcALP1可能为3Bt蛋白的中肠受体蛋白。

关键词  美国白蛾; 碱性磷酸酶; Bt Cry蛋白; 配体印迹; 实时荧光定量PCR

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