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国内刊号:CN 32-1115/S
国际刊号:ISSN 0257-4799
主管部门:中国科学技术协会
主办单位:中国蚕学会
             中国农业科学院蚕业研究所
主 编:郭锡杰
编辑部主任:魏幼平
刊社地址:江苏省镇江市四摆渡
             中国农业科学院蚕业研究所
邮政编码:212018
电 话:0511-85616835
传 真:0511-85616835
信 箱:canyekexue@126.com
 
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家蚕AGO1蛋白结合RNA的分离与鉴定
【出版年份】
2019年第3期
【资助项目】
国家自然科学基金项目(No.31772677),浙江省自然科学基金项目(No.LGF18H250004)。
【作者姓名】
杨帆 高珍 马亚飞 蒋彩英 吕正兵 盛清 聂作明
【作者单位】
浙江理工大学生命科学与医药学院,杭州310018

摘要  RNA诱导的基因沉默复合体(RNA-induced silencing complexRISC)核心蛋白为Argonaute(AGO)家族蛋白,作为miRNARNAi功能途径中的关键蛋白,能够结合miRNAsiRNA,降解靶标基因mRNA或抑制其翻译。因此,利用AGO蛋白抗体通过免疫沉淀分离其结合RNA是目前规模化分离鉴定miRNA及相关小RNA靶基因的重要方法。首先对家蚕AGO1基因进行克隆表达和抗体制备,用自制的兔多克隆抗体免疫沉淀家蚕组织内源BmAGO1蛋白,成功分离BmAGO1蛋白结合的RNA;同时在BmN细胞中采用6×His标签融合表达BmAGO1蛋白,用His单抗免疫沉淀His-BmAGO1蛋白,同样成功分离获得其结合RNAqRT-PCR检测发现,BmAGO1蛋白结合的RNA中含有家蚕miRNA靶基因BmEm4mRNA。研究结果为批量鉴定家蚕miRNA靶基因奠定了基础,同时也为深入研究BmAGO1蛋白在家蚕中的功能提供了依据。

关键词  家蚕; BmAGO1蛋白;  免疫共沉淀; AGO结合RNA miRNA靶基因

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