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国内刊号:CN 32-1115/S
国际刊号:ISSN 0257-4799
主管部门:中国科学技术协会
主办单位:中国蚕学会
             中国农业科学院蚕业研究所
主 编:郭锡杰
编辑部主任:魏幼平
刊社地址:江苏省镇江市四摆渡
             中国农业科学院蚕业研究所
邮政编码:212018
电 话:0511-85616835
传 真:0511-85616835
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美国白蛾氨肽酶N的基因克隆表达及与苏云金杆菌3种毒素蛋白的结合特性分析
【出版年份】
2019年第1期
【资助项目】
国家现代农业产业技术体系建设专项(No.CARS-13),河北省自然科学基金项目(No.C2017204072),河北省山区核桃近自然生产技术创新与示范项目(No.16236810D)
【作者姓名】
刘子欢 赵丹 常梦颖 张雅昆 徐畅 陆秀君 郭巍
【作者单位】
1河北农业大学植物保护学院,河北 保定071001;2河北省核桃工程技术研究中心,河北 保定071001;3黄骅港海关,河北 沧州061113

摘要  美国白蛾(Hyphantria cunea)是桑树的重要害虫。为明确苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis)杀虫晶体蛋白对该虫的作用机制,利用已知昆虫氨肽酶N基因序列设计引物,以美国白蛾中肠cDNA为模板,利用RACE-PCR技术获得美国白蛾中肠氨肽酶N基因hcapn1全长序列(GenBank登录号:KP053647)。该基因开放阅读框为3 000 bp,编码999个氨基酸,预测蛋白质的分子质量和等电点分别为113.14 kD4.85。设计去信号肽引物PCR扩增获得hcapn1基因序列,构建原核重组表达载体pET30a-hcapn1,诱导表达的HcAPN1重组蛋白约110 kD。将苏云金杆菌Cry1AcCry2Ab33Cry9Ea6原毒素经胰蛋白酶消化后与HcAPN1重组蛋白分别进行体外配体印迹试验,发现HcAPN1重组蛋白与Cry9Ea6结合,而不与Cry2Ab33Cry1Ac发生特异结合,推测HcAPN1可能为Cry9Ea6在美国白蛾中肠的受体蛋白。分别设计引物扩增HcAPN1蛋白2个结构域Asp34Asp 527Leu563Gln925的编码序列,在大肠埃希菌中表达获得62 kD48 kD 2种重组蛋白,体外结合试验显示Cry9Ea6HcAPN1的结合发生在Leu563Gln925之间。研究结果为深入理解苏云金杆菌Cry9Ea6蛋白对美国白蛾的杀虫机制提供了基础数据。 

 

关键词   美国白蛾; 氨肽酶N Bt蛋白; 配体印迹

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